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简析铅笔柏构基组配时的质体的杀毒

作者:admin来源:中国文具网 日期:2012-2-17 15:11:29 人气: 标签:

  培养条件和接种初代培养基本培养基采用MS培养基,琼脂6g/L,糖30g/L,pH值为6.所有的培养基均在121下灭菌25min.培养间温度为(252),光照2800lx,光照时间14h/d。接种时每瓶接1个茎段,每天观察1次。

  外植体的灭菌把准备好的外植体刺形叶小枝先用洗衣粉水刷洗,然后用流水冲洗,再加入漂白粉饱和溶液的上清液中灭菌2540min,倒出漂白粉溶液后即加入0.1HgCl2溶液灭菌515min,后用无菌水冲洗45遍。注意灭菌药剂的溶液和无菌水的加入量以没过要处理的外植体表面为宜,其间不断摇动,以达到充分灭菌的目的。铅柏先用热水浸泡24h,然后加入漂白粉饱和溶液的上清液中灭菌2540min,倒出漂白粉溶液后即加入0.1HgCl2溶液灭菌515min,后用无菌水冲洗45遍。其间不断摇动,以达到充分灭菌的目的。值得指出的是,由材料的木质化程度决定消毒时间,对幼嫩材料的消毒时间应相应缩短。

  初代培养建立初代培养与大多数针叶树种一样,铅笔柏组织培养中的困难之一是建立无菌材料。由于铅笔柏的小枝上排列有鳞叶,且长时间暴露在田间,菌类滋生,有的菌类甚至长入组织内部,致使表面消毒剂很难杀死组织内部的菌类而导致材料在接种之后污染。目前,对材料内部污染的问题尚无令人满意的解决办法。

  在外植体灭菌的过程中,小枝污染发生的比较严重,种子污染较轻。根据以往的经验,外植体的灭菌应选择不同药剂、不同浓度、不同采条时间及采条后不同的处理方法进行试验,但由于客观原因,只用不同药剂、不同时间进行试验。

  铅笔柏种子不同药剂、时间污染死亡统计表单位:种子漂白粉25min漂白粉30min漂白粉35min漂白粉40min0.1升汞5min10098950.1升汞10min10083750.1升汞15min100602095从中可以看出,对于铅笔柏种子灭菌以漂白粉溶液35min,0.1升汞15min为好。在实际操作过程中,我们曾经在超净工作台上将种子皮剥离只留胚,然后接种,但全部污染。

  初代培养基的筛选铅笔柏小枝及种子经灭菌处理后转入初代培养基,1015d后,小侧枝伸长展叶,这时依靠小枝自身的营养供给其生长发育,待幼茎抽到一定高度后,切割分段,进行继代繁殖。在试验过程中,设计6种不同浓度激素组合,观察其对铅笔柏小枝生长状况的影响,见,通过观测,适宜铅笔柏初代培养的培养基是MS+BA1.5mg/L+NAA0.05mg/L.

  不同浓度的激素对铅笔柏小枝的影响激素浓度/mgL-1接种数/个生长情况BA1+NAA0.0530小侧枝几乎不长BA1+NAA0.130小侧枝伸长淡绿,长势较弱BA1.5+NAA0.0530小侧枝伸长淡绿,长势粗壮BA1.5+NAA0.130小侧枝茎尖卷曲,生长较弱BA2+NAA0.0530小侧枝几乎不长BA2+NAA0.130小侧枝几乎不长不同浓度的激素对铅笔柏种子的影响激素浓度/mgL-1接种数/个生长情况BA1+NAA0.0560未见发芽BA1.5+NAA0.0560未见发芽BA2+NAA0.0560未见发芽对于铅笔柏种子也设计了3种不同浓度激素的组合,如,但因种子预处理不好,所以60d也未见发芽。由于客观原因,铅笔柏组织培养只筛选出初代培养基,尚未筛选出适宜的分化继代培养基和生根培养基,如要进行规模快繁,还需在已有的工作基础上进一步开展试验研究。

  讨论污染是组织培养过程中经常遇到的首要问题,但又很难控制。外植体接种成功与否,主要取决于外植体的选取和消毒灭菌方法的掌握。对于铅笔柏小枝灭菌以漂白粉溶液35min,0.1升汞10min灭菌处理效果好,而对于铅笔柏种子灭菌以漂白粉溶液35min,0.1升汞15min处理效果好。值得注意的是,污染死亡率中除污染死亡外,还包括灭菌药剂浓度过高而使小枝死亡的数。

  不同浓度的激素对对于铅笔柏小枝生长状况的影响是铅笔柏组织培养的关键问题,经试验,适宜铅笔柏小枝初代培养的培养基是MS+BA1.5mg/L+NAA0.05mg/L.对于木本植物来说,处在旺盛生长期的胚乳诱导频率较高,而接近成熟或完全成熟的种子诱导频率很低,也可能是激素的种类、蔗糖的浓度以及光照的强度和时间等因素的影响或者所有这些因素的并置作用,从而导致种子败育。

  植物组织培养和快速繁殖技术,虽然有不少成功的经验,但由于植物种类和品种的不同,培养条件的差异,不少难关需要逐步攻克。在实验启动之初,我们查阅了大量文献,但在实验研究中仍然没有大的进展,由此我们深深感到在这个研究领域中,我们还要刻苦钻研、不断开拓新的思路,才能取得新的突破。

 

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